Core Unit FACS

Leitung:
Prof. Charlotte Esser tl_files/bilder/mail.gif
Telefon: +49 (0)211-3389-253

Wissenschaftler:
Dr. Nadine Teichweyde (Schulung, Beratung, Unterstützung) tl_files/bilder/mail.gif
Telefon: +49 (0)211-3389-252

Profil

Durchflusszytometrische Messungen und Zellsortierungen werden für viele Fragestellungen am IUF genutzt. Hauptanwendungsgebiete sind:

• Charakterisierung von Zellen mittels Oberflächen- oder intrazellulärer Färbung
• Kalziuminflux
• Profilerstellung des Mikrobioms
• Zellzyklusanalyse Zellproliferations- und Zytotoxizitäts Analysen
• Nachweis von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS)

Die Core Unit ist mit einem FACS Canto II Analysegerät und mit einem FACS Aria III Hochgeschwindigkeits-Zellsortierer zur Messung und Sortierung von Zellen ausgestattet. Beide Instrumente sind von der Firma Becton-Dickinson.

Das FACS Canto II Analysegerät ist mit drei Lasern ausgestattet (405 nm, 488 nm, 633 nm) und acht Fluoreszenzkanälen für Multi-Parameter-Analysen.

Die Konfiguration des FACS Aria III Instruments mit vier Lasern (405 nm, 488 nm, 561 nm, 633 nm) ermöglicht die Detektion von sechszehn Fluoreszenzparametern gleichzeitig. Zusätzlich können 4-Wege-Sortierungen und Einzelzell-Sortierungen direkt in 6, 12, 24, 48, 96 Well-Platten mit der Möglichkeit der Index-Sortierung durchgeführt werden, was eine retrospektive Identifizierung des Phänotyps jeder einzelnen Zelle ermöglicht.

Als Software verwenden wir FlowJo™ and FACSdiva™. Insgesamt ermöglicht die FACS-Unit die Beantwortung und Durchführung einer breiten Palette von analytischen Fragen und Sortieransätzen. Darüber hinaus ist die FACS Unit ein S2-Labor und ein Labor der Biosicherheitsstufe 2.

Frau Dr. Teichweyde führt auf Anfrage auch Zellsortierungen am FACS Aria III durch und bietet Schulungen, Hilfe und Unterstützung für die Anwender an. Erstmalige Anwender sollten sich mit Einzelheiten zu den Versuchsplänen, einschließlich der S1-, S2- oder Biosicherheitsanforderungen, an sie wenden.


Empfohlene Fachliteratur

Cossarizza…Esser… et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies. Eur J Immunol. (2017) 47:1584-1797.


Jamie A. Lee et al. MIFlowCyt: The Minimum Information About a Flow Cytometry Experiment. Cytometry Part A. (2008) 73:926-30.


Esser C, Hochrath K, Teichweyde N, Krutmann J, Chang HD. Beyond sequencing: fast and easy microbiome profiling by flow cytometry. Arch Toxicol. (2019) 93:2703-2704.


https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/


Weitere Informationen über Fluoreszenzfarben und ihre Spektren:


https://www.bdbiosciences.com/en-us/applications/research-applications/multicolor-flow-cytometry/product-selection-tools/spectrum-viewer


Fluorochrom/Laser-Referenzplakat:

https://www.bdbiosciences.com/documents/multicolor_fluorochrome_laser_chart.pdf